兔抗綿羊紅細胞(溶血素)使用方法
利用綿羊細胞與相應抗體(溶血素)結合成的復合物,可激活血清中的補體,導致紅細胞溶解,當紅細胞和溶血素量一定時,在規定反應的時間內,溶血程度與補體量及活性呈正相關。在接近50%溶血(CH50)時,二者之間近似直線關系,故以50%溶血作為敏感的判斷終點。以引起50%溶血所需的小補體量為一個 CH50U,可計算出待測血清中總的補體溶血活性,以 CH50U /ml表示。
產品全稱:兔抗綿羊紅細胞
別稱: 溶血素、SRBC抗體
外觀性狀:液體
包裝量: 1ml/瓶x10
成分:免抗綿羊紅細胞血清
效價: 1:4000
存貯: -20℃可存貯1年;避光保存,避免反復凍融。
相關實驗測定步驟:(僅供參考)
本試驗主要反映補體經典活化途徑的溶血功能,其結果與補體C1~C9各組成分的量及活性均有關。
1.試劑及配制
(1)緩沖生理鹽水:
①貯存液:
Na2HPO4•12H20 2.85g
KH2PO4 0.27g (加蒸餾水至100毫升,4℃保存)
NaCl 17.00g
②應用液(緩沖液):5毫升貯存液加95毫升蒸餾水,再加10%硫酸鎂0.1毫升。當日配制。12小時內使用。
(2)2%綿羊紅細胞:無菌采取綿羊血液,于等量阿氏液中可保存4周。用以緩沖液
洗3次,并配成2%細胞懸液。必要時可用吸光光度法或細胞計數法使懸液細胞濃度標準化。
(3)溶血素:將本品(效價1:4000),用緩沖液做1:2000倍稀釋(即1ml溶血素加1999毫升緩沖液)。
(4)待測血清:新鮮血液室溫放置30分鐘,再4℃放置60分鐘,使血塊收縮。4℃離心
(3000r/min )10分鐘,取上清,-20℃保存。
2.試管法操作步驟(改良 Mayer 法)
(1)致敏羊紅細胞:2%綿羊紅細胞加等量稀釋后的溶血素(1:2000),混勻,置37℃水浴30分鐘。
(2)稀釋血清:待測血清0.2ml,加緩沖液3.8ml,稀釋度為1:20。
(3)配制溶血標準管:2%綿羊紅細胞2ml加8ml蒸餾水,混勻,即為全溶血管。取全溶血管液2ml加緩沖液2m1,即為50%溶血管。
(4)按表所示,依次加各成分于試管中,混勻,置37℃水浴30分鐘。第10管為非溶血對照。