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Taq DNA連接酶應用范圍

更新時間:2023-05-18      瀏覽次數:262

Taq DNA連接酶應用范圍


Taq DNA 連接酶是一種熱穩定性連接酶,能夠催化磷酸二酯鍵的形成,使與同一互補靶 DNA 鏈雜交的兩條相鄰寡核苷酸鏈的 5′-磷酸末端和 3′-羥基末端通過磷酸二酯鍵相連。Taq DNA 連接酶催化的連接反應只有當兩條寡核苷酸鏈與互補靶 DNA 完全配對,并且兩條寡核苷酸鏈之間沒有空隙的條件下才可發生。因此,可以用它來檢測單堿基替換。在 45℃-65℃ 范圍內,Taq DNA 連接酶均有活性。

應用
 雙鏈DNA切刻的修復
用于Gibson組裝方法的建立
 活性定義
 1 單位指 50μl 反應體系中,45℃ 條件下,15 分鐘內能使 50% 的1μg 經 BstEII 消化的 λDNA 片段(12 bp 粘性末端)發生連接所需要的酶量。 
儲存
 -20℃可保存半年,長期儲存請置于 -70℃。 
1× Taq DNA 連接酶反應緩沖液

 20 mM Tris-HCl(pH 7.6),25 mM KAc,10 mM Mg(Ac)2,10 mM DTT,1 mM NAD 和 0.1% Triton X-100,45℃ 溫育。 該酶需 NAD+ 作輔因子,在 10× Taq DNA 連接酶緩沖液中已添加 NAD+;為了延長 NAD+ 的半衰期,緩沖液應于 -70℃ 貯存。 



合成酶,能催化兩個分子連接成一個分子或把一個分子的尾相連接的酶。此反應與ATP的分解反應相偶聯。在把兩分子相連接的同時發生三磷酸腺苷(ATP)的高能磷酸鍵的斷裂如DNA連接酶等。
連接酶是酶分類中重要的一類(EC 6):6.1形成C-O鍵;6.2形成C-S鍵;6.3形成C-N鍵;6.4 形成C-C鍵。
連接酶的催化反應過程需要Mg離子

  


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