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測定意義:
無機磷主要指磷酸根,參與生物體內多種代謝,包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質磷酸化和脫磷酸化等等,此外促進碳水化合物的合成、轉化和轉運。
測定原理:
鉬藍與磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物質,通過測定660nm光吸收,即可計算無機磷含量。
實驗中所需儀器及設備:
可見分光光度計、離心機、水浴鍋、可調式移液槍、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配置:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前配制,加入20 mL蒸餾水,充分溶解后加入試劑二(全部),混勻。
標準品:液體×1支,2 μ mol/L無機磷標準液,4℃保存。
無機磷提取:
稱取約0.1g組織,加試劑一1.0 mL冰上充分勻漿,4℃,10000rpm,離心10min,取上清液,待測。
無機磷磷含量測定操作:
1. 分光光度計預熱30 min以上,調節波長到660 nm,蒸餾水調零。
2.打開水浴鍋,調節溫度到40℃。
3. 空白管:取EP管,依次加入500μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A空白管。
4. 標準管:取EP管,依次加入50μL標準液,450μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A標準管。
5. 測定管:取EP管,依次加入50μL上清液,450μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A測定管。
需在40min內完成比色。
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