核糖核酸酶A是內切核糖核酸酶，可特異地攻擊RNA上嘧啶殘基的3'端，切割與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵。反應終產物是嘧啶3'磷酸及末端帶嘧啶3'磷酸的寡核苷酸。無輔因子及二價陽離子存在時，核糖核酸酶A的作用可被胎盤RNA酶抑制劑(B1ackburn et al．1977)或氧釩—核糖核苷復合物(Puskas et al．1982)所抑制。


核糖核酸酶A（Ribonuclease A，RNase A），一種含4個二硫鍵的單鏈多肽，分子量約為13.7 kDa。作為一種核糖核酸內切酶（endoribonuclease），特異性降解單鏈RNA上的胞嘧啶（C）或尿嘧啶（U）殘基。具體來說，切割識別的是由某核苷酸上的5’-核糖和相鄰的嘧啶類核苷酸3’-核糖上磷酸基團形成的磷酸二酯鍵，從而使得2’,3’-環磷酸水解為對應的3’-核苷磷酸（比如，pG-pG-pC-pA-pG經RNase A切割產生pG-pG-pCp 和A-PG）。

RNase A切割單鏈RNA活性高，且在多種反應條件下均有活性：在低鹽濃度（0-100 mM NaCl）下，可用來切割單鏈RNA、雙鏈RNA以及RNA-DNA雜交形成的RNA鏈，而高鹽濃度（≥0.3 M）下，RNase A僅特異性切割單鏈RNA。

核糖核酸酶A（RNase A）常見的應用在于質粒DNA或基因組DNA制備過程中去除RNA，因此制備過程中DNase酶活性的存在與否是需要重視的污染之一，可采用水浴煮沸這種傳統方法來滅活DNase活性。另外，本品還可用于RNA酶保護分析、RNA序列分析等分子生物學實驗。
本品以溶液形式提供，濃度為10 mg/mL。推薦工作濃度為1-100 μg/mL，因應用類型的不同而異。

此外，它具有顯著的細胞毒性，可以殺滅許多腫瘤細胞系，可以抑制導致艾滋病的HIV-1病毒在細胞中的復制，可以治療乙肝。
(1)從DNA-RNA或RNA—RNA雜合體中去除未雜合的RNA區。
(2)確定DNA或RNA中單堿基突變的位置(Myers et al．1985，Winter et al．1985)。 在此方法中，RNA-DNA或RNA-RNA雜合體上的單堿基錯配可被RNA酶A識別并切割。利用含SP5或T7噬菌體啟動子的質粒，在體外合成與野生型DNA或RNA互補的32p標記RNA探針，然后與待檢含單堿基置換的DNA或RNA退火， 所產生的單堿基錯配可用RNA酶A切割，通過凝膠電泳分析切割產物的大小即可確定錯配的位置。在所有各種可能的單堿基錯配中，大約50%可用此法確定。