谷丙轉氨酶（ALT/GPT）檢測試劑盒使用說明！

產品名稱：谷丙轉氨酶（ALT/GPT）檢測試劑盒 微板法

檢測原理：谷丙轉氨酶(ALT）在37℃及PH7.4條件下，作用于丙氨酸及a-酮戊二酸組成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反應30分鐘后（固定時間）加入2,4-二硝基苯肼（DNPH）鹽酸溶液，既中止反應，同時DNPH與酮酸中羰基加成，生成丙酮酸苯腙。苯腙在堿性條件下呈紅棕色，于505nm比讀吸光度并計算酶活力。 

測定范圍：本試劑盒可以測定各類動物血清(漿)、組織及培養細胞、細胞培養液等樣本中谷丙轉氨酶活力（ALT）。

自備儀器和用品：

酶標儀（510nm或505nm）、微量移液器、漩渦混勻器

試劑組成：

操作過程（僅供參考）

1.樣本前處理：

A.血清（漿）及其他液體待測樣本：直接取樣測定。

B.動物組織樣本：準確稱取組織重量，按重量（g）:體積（ml）=1：9的比例，加入9倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機械勻漿，2500轉/分，離心10分鐘，取上清液待測。

C.培養細胞樣本前處理：將收集好的細胞用等滲緩沖液（推薦0.1mol/L PH7—7.4磷酸鹽緩沖液或生理鹽水）清洗1—2次；1000轉/分，離心10分鐘，棄上清，留細胞沉淀，加入勻漿介質（推薦加入0.1mol/L PH7—7.4磷酸鹽緩沖液或生理鹽水），冰浴條件下超聲破碎或手動勻漿，制備好的勻漿液不離心，待測。

2．操作表：

測定孔每吸取一個樣本，將吸嘴伸入孔板底部基質液中，反復吸打混勻后

            37℃反應30分鐘

對照孔每吸取一個樣本，將吸嘴伸入孔板底部液體中，反復吸打混勻后

        37℃反應20分鐘

輕輕水平搖動96孔板混勻，室溫放置15分鐘，510nm波長，酶標儀測各孔OD值，以（絕對OD值=測定孔0D值減去對照孔OD值），查標準曲線，求得相應的ALT/GPT活力單位。

注意事項：

1.比色法中常用的有賴氏（Reitman-Frankel）法及金氏法（King）法。賴氏法標準曲線所定單位數，是用實驗方法和卡門氏反光光度法（速率法）作對比測定求得的。以卡門氏單位報告結果比較準確。

卡門氏單位定義：1ml液體，反應液總容量3ml，波長340nm，1cm光徑，25℃，1min內所生成的丙酮酸，使NADH氧化成NAD⁺而引起吸光度每下降0.001為一個單位（1卡門氏單位=0.482U/L,25℃）

2.一般血清標本內源性酮酸很少，血清對照孔吸光度值接近試劑空白孔（以雙蒸水代替血清，其他和對照孔同樣操作）。所以成批標本測定時，一般不需要每一標本都作本身血清對照孔，以試劑空白孔代替即可，但對嚴重脂血、黃疸或溶血血清，每份標本應做對照孔。

3.酶活力超過150單位時，用生理鹽水稀釋血清后重測。

4.一般的血清對照孔（或稱標本空白孔）的吸光度作為日常質控的指標之一；如相差大，可考慮a-酮戊二酸濃度、DNPH濃度及儀器等原因引起。

5.血清中ALT在室溫（25℃）可保存2天，在0--4℃可保存一周，在-25℃可保存1個月。

6.本產品僅供科研實驗用，不做其它用途！