新型快速酵母轉化試劑盒新品現貨供應

產品介紹：

酵母菌落快速轉化試劑盒是以未經凍存的釀酒酵母平板菌落（無需搖菌）或者菌液作為菌體來源（短期4 ℃保存的平板或者菌液亦可使用），無需制備感受態細胞，無需分步熱激，一步轉化，整個操作流程在90 min內完成。省去了通過兩次培養獲得狀態良好的菌體的過程，以及制備感受態的過程，節省了1-2天的菌種培養轉化時間，或者購買感受態的經費。其轉化率可達經典酵釀酒母轉化方法（SK2400）的50-80%（常規酵母雜交菌種檢測）。轉化效率可滿足除文庫傳化之外的其它轉化實驗。

菌落轉化步驟：

1.在無菌的1.5 mL的離心管中加入100 μL的P1溶液（轉化液）。

2.在上述轉化液中加入1 μg的質粒DNA。共轉加入每種質粒各1 μg。

3.挑取2-3個較大酵母菌落加入上述轉化液中，震蕩混勻。

4.置于42 ℃水浴60 min（每隔20 min 顛倒混勻一次，避免酵母菌沉底）。

5.可選步驟：3,000 rpm離心3 min，棄上清。用400 μL YPD Plus Liquid Medium（YT0004）重懸，30 ℃搖床震蕩培養30-60 min。YPD Plus用于轉化后復蘇酵母菌，轉化效率可以提高50-100。

6.3,000 rpm離心3 min。加入100 μL無菌水重懸菌體。

7.將重懸菌體全部涂布于相應的缺陷型培養基平板上。

8.30 ℃恒溫培養3-5天，直至平板長出菌落。

菌液轉化步驟：

收集1.5-3 mL酵母菌液沉淀后，加入100 μL P1溶液（轉化液）和1 μg質粒DNA后震蕩混勻。后續步驟和平板菌落轉化步驟4-8相同。

注意事項：

1. 轉化全程要求無菌操作。

2. 為了保證轉化效率，感受態不宜直接用液氮凍存。

3. 增加酵母質粒的純度和濃度可以提高轉化效率。