培養基配制過程各環節的要求

基本原理

正確掌握培養基的配制方法是從事微生物學實驗工作的重要基礎，由于微生物種類及代謝類型的多樣性，因而用于培養微生物培養基的種類也很多，它們的配方及配制方法雖各有差異。但一般培養基的配制程序卻大致相同，例如器皿的準備，培養基的配制與分裝，棉塞的制作，培養基的滅菌，斜面與平板的制作以及培養基的無菌檢查等基本環節大致相向。

三、實驗材科

(一)藥品

待配各種培養的組成成分，瓊脂，1mol/L NaOH溶液，1mol/l (升，統一用大寫)HCl溶液。

(二)儀器

天平或臺秤，高壓蒸汽滅菌鍋。

(三)玻璃器皿

移液管、試管、燒杯、量筒、錐形瓶、培養皿、玻璃漏斗等。

(四)其他物品

藥匙、稱量紙、pH試紙、記號筆、棉花、紗布、線繩、塑料試管蓋、牛皮紙、報紙等。

四、實驗內容

(一)玻璃器皿的洗滌和包裝

1．玻璃器皿的洗滌

玻璃器皿在使用前必須洗刷干凈。將錐形瓶、試管、培養皿、量筒等浸入含有洗滌劑的水中，用毛刷刷洗，然后用自來水及蒸餾水沖凈。移液管先用含有洗滌劑的水浸泡。再用自來水及蒸餾水沖洗，洗刷干凈的玻璃器皿置于烘箱中烘干后備用。

2．滅菌前玻璃器皿的包裝

(1)培養皿的包裝 培養皿由一蓋—底組成一套。可用報紙將幾套培養皿包成一包，或者將幾套培養皿直接置于特制的鐵皮圓筒內，加蓋滅菌。包裝后的培養皿須經滅菌之后才能使用。

(2)移液管的包裝 在移液管的上端塞入—小段棉花(勿用脫脂棉)。它的作用是避免外界及口中雜菌吹入管內，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花應距管口約0.5cm左有。棉花自身長度約1~1.5cm。塞棉花時，可用一外圈拉直的曲別針，將少許棉花塞入管口內。棉花要塞得松緊適宜，吹時以能通氣而又不使棉花滑下為準。

先將報紙裁成寬約5cm左右的長紙條，然后將已塞好棉花的移液管放在長條報紙的一端，約成45度角，折疊紙條包住，用左手握住移液管身，右手將移液管壓緊，在桌面上向前搓轉，以螺旋式包扎起來。上端剩余紙條，折疊打結，準備滅菌。

(二)液體及固體培養基的配制過程

1．液體培養基配制

(1)稱量一般可用1/100粗天平稱量配制培養基所需的各種藥品。先按培養基配方計算各成分的用量，然后進行準確稱量。

(2)溶化 將稱好的藥品置于一燒杯中，先加入少量水(根據實驗需要可用自來水或蒸餾水)，用玻棒攪動，加熱溶解。

(3)定容 待全部藥品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需體積。如某種藥品用量太少時，可預先配成較濃溶液，然后按比例吸取一定體積溶液，加入至培養基中。

(4)調pH 一般用pH試紙測定培養基的pH。用剪刀剪出一小段pH試紙，然后用鑷子夾取此段pH試紙，在培養基中蘸一下，觀看其pH范圍，如培養基偏酸或偏堿時，可用1mol/l NaOH或1mol/l HCl溶液進行調節。調節pH時，應逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部過酸或過堿，破壞培養基中成分。邊加邊攪拌，并不時用pH試紙測試，直至達到所需pH為止。

(5)過濾 用濾紙或多層紗布過濾培養基。一般無特殊要求時，此步可省去。

2．固體培養基的配制

配制固體培養基時，應將已配好的液體培養基加熱煮沸，再將稱好的瓊脂(1．5％-2％)加入，并用玻棒不斷攪拌，以免糊底燒焦。繼續加熱至瓊脂全部融化，后補足因蒸發而失去水分。