明膠酶譜分析試劑盒文獻支持，你還在猶豫嗎

簡介：
基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無活性的酶原形式分泌，活化后能夠降解細胞外基質的膠原蛋白，又稱膠原酶。通過影響細胞外基質，膠原酶參與胚胎發育、形態發生、組織重塑等過程，并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經等許多疾病過程。血漿與組織中的MMP-2、MMP-9參與各種生理與病理過程，其在臨床診斷和治療中的意義日益受到重視。

檢測原理：
本試劑盒采用酶譜法(Zymography)檢測MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法，其靈敏度可達1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE 凝膠，含蛋白酶的樣品在此凝膠中進行電泳，電泳結束后取出凝膠與酶反應Buffer 孵育，凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮區域，從而能同時指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學反應緩沖液，可檢測少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性，檢測靈敏度~1nM。試劑盒可進行50次標準小膠檢測，如果小膠加樣孔為10~15個，則總計可檢測500~750個樣品。

實驗小技巧：

實驗過程中有出現透明條帶就說明試劑盒內的底物等都是有活性的，試劑盒是沒有問題的。沒有MMP9和prommp2的條帶  可能是活性太低  不知道孵育了多久  另外這個實驗對內參定量沒有特別要求需要做

①、至于WB檢測有條帶，明膠酶譜檢測沒有條帶是這樣的，這兩種檢測方法原理都不相同。一個是檢測變性條件下解離的多肽，一個是活性檢測。不是說一個有條帶另一個一定能檢測出的。

②、關于出現其他條帶，最近我們也研究了，有2個解釋：一個就是酶家族其他成員，另一就是酶的降解產物。

③、全血檢測不出條帶，這個存在的原因也是多方面的，包括樣本和實驗手法等等。結果一直檢測不出，我們也只是給出建議。有時候實驗就是這樣，我們同樣的樣本，同一個人做實驗，這次和下次的實驗結果可能就*不同呢，不是說我們覺得它應該是一樣的或者這個條帶該出來就一定出來的。

說明：
1. 10 mM 能夠EDTA*抑制MMP活性。
2. 凝膠干燥：可使用聚丙烯酰胺凝膠干膠裝置室溫快速干燥凝膠，作為記錄保留。

染色步驟：
1. 此染色液即為工作液，使用時直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養皿中以考馬斯亮藍染色液覆蓋凝
膠，并緩慢搖動2h；
2. 傾去染色液，用脫色液沖洗凝膠；
3. 以脫色液覆蓋凝膠，緩慢搖動2h，傾去脫色液，再加入新脫色液進行脫色，直至獲得清晰的藍色的條帶和干凈的背景（通常此過程需要2～4h，也可脫色過夜至清晰的藍色的條帶和干凈的背景）；
4. 對凝膠進行分析和照相，凝膠可放置在7％的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置（P2000）對
凝膠進行處理后保存。

參考文獻：
1. Nagase H and Woessner JF. Matrix Metalloproteinases. J Biol Chem, 1999, 274, 21491-21494
2. Heussen C, and Dowdle EB. Electrophoretic analysis of plasminogen activators in polyacrylamide
gels containing sodium dodecyl sulfate and copolymerized substrates. Anal. Biochem，1980, 102,196–202