檢驗(yàn)大腸菌群和致病菌

一、大腸菌檢測：1加樣：將試劑盒放在試驗(yàn)臺(tái)面上，打開盒蓋，用滅菌吸管分別吸取3個(gè)原液或1:10樣品稀釋液1ml加到標(biāo)號(hào)為4、5、6的小培養(yǎng)基孔內(nèi)。

另用滅菌吸管分別吸取3個(gè)1:10或1:100的樣品稀釋液1ml加到標(biāo)號(hào)為7、8、9的小培養(yǎng)基孔內(nèi)，標(biāo)號(hào)為10的小培養(yǎng)基孔內(nèi)可加入1ml滅菌生理鹽水作為培養(yǎng)基陰性對(duì)照孔使用。2排氣泡：加樣后集氣窗內(nèi)如有氣泡存在，可將試劑盒以30～45度角傾斜使氣泡排出，必要時(shí)可輕輕用力在桌面上敲擊數(shù)下排出氣泡。3培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24小時(shí)。5. 注意事項(xiàng)：1加入樣品后不需搖勻，平拿平放。2 加樣時(shí)可用一次性無菌塑料吸管，將樣品稀釋液加至試劑盒所標(biāo)刻度處。3 在培養(yǎng)箱中取試劑盒時(shí)應(yīng)平托出來，不要傾斜以免由于試劑盒的傾斜將陽性管集氣窗中的氣泡排出而影響結(jié)果。4觀察結(jié)果：樣液變?yōu)辄S色為產(chǎn)酸、集氣窗中有氣泡為產(chǎn)氣，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者為陽性結(jié)果，陽性結(jié)果的孔數(shù)越多，說明污染越嚴(yán)重。

二.快速檢驗(yàn)方法原理：與國標(biāo)法相同。事先將濃縮乳糖膽鹽培養(yǎng)基、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液、GN增菌液、7.5%氯化鈉培養(yǎng)基、包被在試劑盒中，隨時(shí)取用。依據(jù)國標(biāo)GB/T4789.3.4.5.6.7.10.14-2003方法，采用包被技術(shù)將相對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基包被在試劑盒底部，隨時(shí)取用。省去了實(shí)驗(yàn)前的大量準(zhǔn)備工作，方便、快捷。

三、快速檢驗(yàn)操作方法：

（1）樣品處理：按《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)》GB/T4789.3.4.5.10-2003。2 加樣：將試劑盒放在臺(tái)面上，打開盒蓋，用無菌吸管吸取3個(gè)1：10稀釋液10mL分別加入試劑盒3個(gè)大發(fā)酵培養(yǎng)基孔內(nèi)，用無菌吸管吸取3個(gè)1mL分別加入試劑盒3小發(fā)酵培養(yǎng)基孔內(nèi)。另用無菌吸管取1：10稀釋后的樣品1mL注入到9mL滅菌生理鹽水中(1：100)取此管3個(gè)1mL稀釋液加入到試劑盒另3個(gè)小發(fā)酵培養(yǎng)基孔內(nèi)。另用無菌吸管吸取稀釋后的樣品3個(gè)4mL分別加入致病菌增菌管(孔)(A、B、C)孔內(nèi)。3 排氣泡: 加樣后集氣窗內(nèi)如有氣泡存在，可將試劑盒以30～45度角傾斜，(圖1)必要時(shí)可輕輕用力在桌面敲擊數(shù)下即可排出集氣窗內(nèi)氣泡。4 培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒置36℃± 1℃溫箱中，培養(yǎng)18～24h。

（2）致病菌檢測：1加樣：用滅菌吸管吸取原液或1:10樣品稀釋液4ml～10 ml(不得少于4ml)分別加入到標(biāo)號(hào)為1、2、3、A、B、C的增菌格(孔)內(nèi)。加樣后的1、2、3號(hào)分別為副溶血弧菌、致瀉大腸埃希菌、板奇腸桿菌增菌液;A、B、C分別為金黃色葡萄球菌、沙門菌、臘樣芽孢桿菌增菌液。2培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)6～18小時(shí)。3 觀察結(jié)果：如果某致病菌的增菌液發(fā)生渾濁，即預(yù)示含有此種致病菌。可將渾濁液接種于各相對(duì)應(yīng)的選擇性培養(yǎng)基上或接種于相對(duì)應(yīng)的測試片上。置36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，18～24小時(shí)觀察驗(yàn)證結(jié)果。

四、快速測試適用范圍：適用于各類食品、純凈水等樣品中大腸菌群數(shù)檢測，致病菌(沙門菌、志賀菌、金黃色葡萄球菌)的快速篩查或進(jìn)一步檢測；致病性沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血弧菌、致瀉大腸埃希菌、臘樣芽孢桿菌、板奇腸桿菌檢測的前期增菌預(yù)實(shí)驗(yàn)觀察以及大腸菌群污染程度的檢測。