億迅生物知識小課堂：正確預防細胞污染的錦囊妙計

大家都知道培養細胞時受到嚴重污染，有時候即使想盡各種辦法也難以挽回。因此，防止污染，預防是關鍵。只有將預防措施貫穿于整個細胞培養的始終，才能將發生污染的可能性降低。

億迅生物為大家分享如何正確預防細胞污染應該從以下幾方面著手：（僅供參考）

（1）添加抗生素

各種抗生素性質不同，對各種微生物的作用也不同，聯合應用比單用效果好，預防性應用比污染后使用好（但迄今尚無對抗支原體抗生素）。但反復使用抗生素會使微生物產生耐藥性，且對細胞本身也有一定影響，因此為避免誘導抗藥細菌，應定期更換培養系統中的抗生素，或盡可能不用抗生素處理。

（2）從物品、用品消毒滅菌著手

細胞培養所用物品清洗、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細，并在取樣檢菌一周后確認無菌才能使用。同時，在無菌過濾操作中，隨著濾過體積的增大，濾膜破損的可能性增加，故應選擇后過濾的液體進行檢測。定期對二氧化碳培養箱進行消毒。具體操作：75%的酒精搽拭培養箱后，使用可移動的紫外燈至少消毒30min，加入高壓滅菌過的超純水于培養箱水槽中保持濕度。也可配制300ml 的飽和硫酸銅加3L 滅菌超純水混合成硫酸銅溶液加入水槽中。

（3）從操作者做起

①進無菌室前要*洗手，按規定穿隔離衣。開始操作前要用 75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。

②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應在火焰近處并經過燒灼進行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內的培養液成分如蛋白質等燒焦后會產生有害物質，吸管再用時會將其帶到培養液中；膠塞、橡皮及塑料的細胞培養用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產生有害氣體，危害培養細胞，同時塑料細胞培養用品也會產生變形影響使用。

③使用培養液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養液應保持斜位，避免直立，以防止下落細菌的污染。不再使用的培養液應立即封閉瓶口，培養的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。

④操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。

⑤吸取培養液、細胞懸液時，應專管，一旦發現吸管口接觸了手和其他污染物品應棄去，以防止污染擴大或造成培養物之間的交叉污染。

⑥操作完畢后應整理好工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面。

（4）防止細胞交叉污染

所有從別處轉來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發生交叉污染，可做細胞遺傳學方面的鑒定，如發現原有的細胞遺傳物發生改變，可以復蘇早期凍存的細胞使用。重要細胞系（株）的傳代工作應由兩人獨立進行。

（5）無菌室的*消毒

①酒精全面*擦洗無菌室。使用前應稀釋即配即用。

②甲醛熏蒸法：甲醛是一種廣譜滅菌劑菌，其水溶液和氣體對各種細菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。甲醛價廉，熏蒸消毒時不損壞衣服、家具、皮革、橡膠等。市售的甲醛水溶液中一般含37－40%的甲醛。

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