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ATP 含量檢測試劑盒現貨供應
產品說明: ATP 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是生物能量通貨,能荷是描述細胞能量 代謝狀態的主要參數。測定 ATP 含量并且計算能荷,能夠反映能量代謝狀態。 HK 催化葡萄糖和 ATP 合成 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步催化 6-磷酸葡萄糖脫氫 生成 NADPH ,NADPH 在 340nm 有特征吸收峰,NADPH 和 ATP 含量成正比,以此反應 ATP 含 量。
自備儀器和用品: 紫外分光光度計、水浴鍋、可調式移液槍、1mL 石英比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水和氯仿。
操作步驟:
一、ATP 的提取:
1、血清(漿)中 ATP 的提取:按照血清(漿)體積(mL):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比 例(建議取約 0.1mL 血清(漿),加入 1mL 提取液),充分震蕩,10000g,4℃離心 10min;取 上清液至另一 EP 管中,加入 500μL 的氯仿充分震蕩混勻,10000g 4℃離心 3min,取上清,置 冰上待測(不可用于蛋白質含量測定)。
2、組織中 ATP 的提取:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿,8000g 4℃離心 10min,取上清至另一 EP 管中,加入 500μL 的氯仿充分震蕩混勻,10000g 4℃離心 3min,取上清,置冰上待測(不可用于蛋白質含量測定)。
3、細胞或細菌中 ATP 的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液), 超聲波破碎 1min(冰浴,強度 20%或 200W,超聲 2s,停 1s),10000g 4 ℃離心 10min;取上 清液至另一 EP 管中,加入 500μL 的氯仿充分震蕩混勻,10000g 4℃離心 3min,取上清,置冰 上待測(不可用于蛋白質含量測定)
注意事項:
1、 加入提取液離心后的上清若為渾濁為正常現象。
2、 提取過程嚴格在冰浴條件下進行。
3、 當吸光值大于 1.2 或者ΔA 測定大于 1.2 時,可以將樣品稀釋后進行測定。若吸光值小于 0.01, 則可以增加反應時間(5min 或 10min)來測定,標準品需要增加同樣的反應時間。
025-65010873
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