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描述:測(cè)定原理:還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。β-淀粉酶不耐熱,在70℃鈍化15min,從而測(cè)定α-淀粉酶活性。α-淀粉酶檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:α-淀粉酶檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品概述
α-淀粉酶檢測(cè)試劑盒
測(cè)定意義:
淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖,同時(shí)使淀粉的粘度降低,因此又稱(chēng)為液化酶。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:25mL×1瓶,常溫保存,若有黃色晶體析出,需加熱溶解后再用;
試劑二:20mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
稱(chēng)取約0.1g樣本,加0.8mL蒸餾水勻漿;勻漿后在室溫下放置提取15min,每隔5min振蕩1次,使其充分提取;3000g,常溫離心10min,吸取上清液并且加蒸餾水定容至10 mL,搖勻,即為淀粉酶原液。
操作步驟和加樣表(在1.5mLEP管中依次加入下列試劑):
1、β-淀粉酶滅活:
試劑(μL) | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 |
α?淀粉酶原液 | 250 | 250 |
70℃水浴15min左右,冷卻
2、加入試劑一并且保溫:
試劑一 | 500 |
|
將以上對(duì)照管、測(cè)定管和試劑二置于40℃恒溫水浴中保溫10min左右
3、準(zhǔn)確反應(yīng)5min
試劑二 | 250 | 250 |
在40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫5min
4、加入試劑一,并且混勻
試劑一 |
| 500 |
混勻,室溫靜置10min,蒸餾水調(diào)零,540nm處讀取對(duì)照管和測(cè)定管吸光度,分別記為A1和A2。
α-淀粉酶檢測(cè)試劑盒
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